Biotin-L-Tyrosine,生物素-L-酪氨酸(Biotinyl Tyramide)是將生物素(biotin)與L-酪氨酸(或其衍生物酪胺)通過共價鍵偶聯形成的雙功能分子,兼具生物素的高親和力結合能力與酪氨酸部分的化學活性,在生物化學與生物醫學研究中應用廣泛。
基本信息
英文名:Biotin-L-Tyrosine / Biotinyl Tyramide。生物素部分含噻唑環和咪唑環,可與親和素(Avidin)或鏈霉親和素(Streptavidin)以較高親和力結合(Kd ≈ 10?1? M)。酪氨部分含活性酚羥基,可作為辣根過氧化物酶(HRP)的底物。
外觀:通常為粉末,水溶性良好,可溶于PBS、HEPES等生物緩沖液。
儲存條件:-20℃、避光、干燥密封保存。
僅供科研使用,不可用于人體。
結構與偶聯方式
生物素通過其羧基端或活化中間體(如NHS酯)與L-酪氨酸的α-氨基形成穩定的酰胺鍵。若使用酪胺(tyramide)而非完整L-酪氨酸,則保留酚羥基的化學活性,該酚羥基在HRP催化下可生成高活性自由基,與靶標蛋白或核酸中的酪氨酸殘基共價結合。整體酰胺鍵在中性或弱堿性緩沖液中穩定,不易水解。
核心用途——酪胺信號放大(TSA)
其信號放大機制分三步:第一步,HRP標記的抗體或探針識別并結合靶點后,在H?O?存在下催化生物素-酪胺的酚羥基生成高活性自由基。第二步,自由基與靶點鄰近的蛋白質酪氨酸殘基共價結合,將生物素定點沉積于靶區域。第三步,鏈霉親和素偶聯的熒光染料、酶或金屬粒子再與生物素結合,實現二級信號放大,檢測靈敏度可較常規IHC/IF提高10–100倍。
其他應用
除TSA外,該分子還可用于蛋白質互作研究中的生物素 Pull-down實驗、ELISA信號增強、Western blot增敏檢測,以及細胞表面蛋白的生物素標記與追蹤。
使用注意事項
酚羥基對光和強氧化劑敏感,操作全程應避光。凍干粉復溶后建議分裝保存,避免反復凍融。工作液濃度依實驗體系而定,TSA應用中酪胺濃度通常在1:50–1:200稀釋范圍。緩沖液pH建議維持在7.0以上,酸性環境會導致酚羥基活性降低。
Biotin-L-Tyrosine,生物素-L-酪氨酸
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