一、基本信息

JC-1，全稱5,5′,6,6′-四氯-1,1′,3,3′-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物，英文名為5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide，別名CBIC2(3)。CAS號3520-43-2，分子式C??H??Cl?IN?，分子量652.23。外觀為紅褐色至紅棕色固體粉末，純度通常≥95%（HPLC驗證）。易溶于DMSO（濃度可達10 mg/mL），不溶于水。存儲條件為-20°C以下、避光、干燥、密封保存，建議充惰性氣體（氮氣或氬氣）保護，避免反復凍融。

二、主要應用

細胞凋亡研究： 這是JC-1最核心的應用。通過紅綠比值的變化，可以在凋亡發生的最早期（線粒體膜電位下降階段）即檢測到信號，比Annexin V/PI雙染法早數小時，比TUNEL法更早。廣泛用于藥物誘導凋亡、輻射損傷、氧化應激等模型中。

線粒體功能研究： 監測線粒體膜電位在不同生理或病理條件下的動態變化，如缺氧/復氧、鈣超載、代謝應激等。

藥物篩選與評價： 評估候選藥物對線粒體功能的影響，判斷藥物是否具有線粒體毒性，是藥物安全性評價的常規手段之一。

神經退行性疾病研究： 在阿爾茨海默病、帕金森病、ALS等疾病模型中，線粒體功能障礙是核心病理特征之一，JC-1可用于評估線粒體損傷程度。

干細胞研究： 監測干細胞分化過程中線粒體膜電位的動態變化，評估干細胞的質量和分化狀態。

三、存儲與實驗注意事項

存儲條件： -20°C以下、避光、干燥、密封保存，建議充惰性氣體保護。

溶解方式： 用無水DMSO配制成儲存液（通常5-10 mM），-20°C避光保存。使用前用生理緩沖液（如PBS、HBSS或無血清培養基）稀釋至工作濃度（通常2-10 μM）。

工作濃度： 一般為2-10 μM，具體需根據細胞類型和實驗目的預實驗優化。濃度過高（>20 μM）可能產生非特異性染色或毒性；濃度過低（<1 μM）信號太弱。

DMSO終濃度： 反應體系中DMSO濃度不應超過0.1%-0.2%（即終濃度≤2 μL/mL），否則可能影響細胞活性。

染色時間： 一般30-45分鐘，37°C孵育。染色時間過長可能導致探針重新分布，影響比值準確性。

洗滌步驟： 染色后需用預熱的PBS或緩沖液洗滌2-3次，去除未結合的JC-1單體，降低背景綠色熒光。

避免光漂白： 全程避光操作，染色后盡快檢測，不要長時間暴露在激發光下。

緩沖液選擇： 避免使用含伯胺的緩沖液（如Tris、甘氨酸），它們會與JC-1競爭反應。推薦使用PBS、HBSS或HEPES緩沖液（pH 7.2-7.4）。

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