BHQ-2 NHS 是一種重要的熒光淬滅試劑，屬于黑洞猝滅劑（Black Hole Quencher, BHQ）系列中的非熒光淬滅劑衍生物，以下是關于其詳細介紹：

一、基本信息

• 中文名稱：BHQ-2琥珀酰亞胺酯、BHQ-2活性酯

• 英文名稱：BHQ-2 NHS、BHQ-2-succinimide ester

• CAS號：916753-62-3

• 分子式：C29H29N7O8

• 分子量：603.58-603.59

• 外觀：深紫色粉末、棕色至黑色固體

• 純度：通常≥95%

結構式：

二、結構特點

• BHQ-2淬滅核心：由多環芳香雜環共軛結構組成，無固有熒光。通過非輻射能量轉移機制高效耗散熒光團的激發能量，實現淬滅功能。吸收光譜覆蓋550-650nm，適配TAMRA、ROX、Texas Red等常見熒光染料。

• NHS活性酯基團：在中性至弱堿性環境（pH 7.0-8.5）下，能與蛋白質、寡核苷酸、抗體等生物分子的伯氨基（-NH?）快速反應，形成穩定的酰胺鍵。

• 柔性連接臂：介于淬滅核心與活性酯之間，既保障了NHS酯的反應活性，又為BHQ-2與熒光團提供了空間距離，提升FRET效率。

三、化學性質

• 溶解性：易溶于二甲基亞砜（DMSO）、二甲基甲酰胺（DMF）等極性有機溶劑，難溶于水。標記實驗中需先配制高濃度有機母液，再稀釋至水相反應體系。

• 穩定性：固體狀態下低溫避光保存可保持數月穩定性，但溶液狀態下易受水解影響，需現配現用。NHS活性酯基團對水分高度敏感，遇水易發生水解失效，因此需嚴格無水操作。

• 光穩定性：BHQ-2核心結構具有較高的抗光漂白性能，適合長時間熒光檢測實驗，特別是在實時PCR等連續光照條件下。

四、特性

• 高效熒光淬滅：BHQ-2 NHS可形成FRET（熒光共振能量轉移）體系，在探針未結合靶標時保持淬滅狀態，高效抑制熒光發射，實現信號的低背景和高信噪比。

• 化學可修飾性：NHS官能團專一性高，能夠與分子中自由氨基形成酰胺鍵，實現穩定的共價偶聯。

• 水溶性與生物兼容性：酸性或緩沖條件下具有一定溶解性，并可與生物體系兼容，適用于多種體外和部分體內實驗。

• 寬光譜吸收：覆蓋綠色至橙紅光譜，使其可在多通道熒光實驗中選擇性淬滅特定染料信號，避免信號串擾。

• 化學與熱穩定性：在緩沖液、溫和生物條件下，BHQ-2 NHS保持化學結構穩定和淬滅效率，可用于長期實驗和探針構建。

五、應用領域

• 分子診斷：在實時熒光定量PCR（qPCR）中作為探針3'端或中間位置的淬滅基團，確保熒光僅在擴增過程中被釋放。

• 分子成像與生物傳感：通過與肽、抗體偶聯，用于構建“關-開"型熒光探針，實現特定酶活性、代謝物或信號分子的動態檢測。

• 多重檢測與高通量分析：由于其吸收范圍覆蓋多種熒光波段，BHQ-2 NHS非常適合復雜樣品的多目標檢測體系。

• 藥物篩選：與底物偶聯形成熒光淬滅底物，用于實時監控酶抑制活性，助力藥物研發。

• 寡核苷酸探針設計：常用于TaqMan探針、分子信使探針或分子信號開關底物設計。探針未結合靶標時，熒光被淬滅；靶標結合或酶切后熒光恢復，實現高靈敏度檢測。

• 蛋白質標記與活性檢測：通過與蛋白質或肽的氨基偶聯，可制備淬滅探針、酶底物或生物傳感器，用于蛋白相互作用、酶活性和分子動力學研究。

• 納米材料功能化：可與納米顆粒、脂質體或功能性生物材料偶聯，構建熒光淬滅探針或智能藥物載體，實現靶向和信號調控。

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