Biotin-bisamido-SS-NHS Ester（CAS: 142439-92-7）是一種雙生物素可裂解型氨基反應(yīng)性標記試劑，核心優(yōu)勢在于雙生物素高親和力 + 雙硫鍵可斷裂 + NHS酯高效偶聯(lián)三合一設(shè)計。以下是其主要用途：

一、蛋白質(zhì)標記與高靈敏度檢測

通過NHS酯與蛋白質(zhì)、抗體或酶上的伯氨基（-NH?）形成穩(wěn)定酰胺鍵，將雙生物素標簽連接到目標分子上。雙生物素設(shè)計使其與鏈霉親和素的結(jié)合力顯著增強（一個鏈霉親和素可同時結(jié)合兩個生物素），標記靈敏度和檢測信號大幅提高，特別適合Western blot、ELISA、免疫熒光、流式細胞術(shù)等需要高靈敏度檢測的場景。標記后加入還原劑（DTT、BME或TCEP）即可斷裂雙硫鍵，溫和釋放天然活性蛋白。

二、Pull-down與靶點鑒定

先通過NHS酯將雙生物素標簽連接到含炔基標記的小分子藥物或蛋白質(zhì)上，再用鏈霉親和素磁珠富集。雙點結(jié)合使捕獲更牢固，非特異性吸附更低。還原洗脫后獲得天然活性蛋白，可直接用于質(zhì)譜鑒定和藥物靶點發(fā)現(xiàn)。相比普通單生物素試劑，雙生物素設(shè)計大幅提升了捕獲效率和檢測靈敏度。

三、可逆親和純化與低豐度蛋白富集

在蛋白質(zhì)組學研究中，該試劑標記蛋白質(zhì)后通過鏈霉親和素系統(tǒng)富集，再用還原劑溫和洗脫回收。整個過程無需SDS、尿素等強變性劑，目標蛋白活性完整保留，特別適合酶蛋白、治療性抗體等對活性要求較高的分子的純化，也適合復雜樣品中低豐度蛋白的分離與質(zhì)譜鑒定。

四、PROTAC合成（PROTAC Linker）

Biotin-bisamido-SS-NHS Ester 被明確歸類為PROTAC Linker，可用于PROTAC分子的模塊化構(gòu)建。雙生物素端提供強結(jié)合力，雙硫鍵提供可裂解性，NHS酯提供偶聯(lián)活性，是合成蛋白降解靶向嵌合體（PROTAC）的理想連接子單元。

五、可控釋放藥物遞送

利用雙硫鍵的還原響應(yīng)性，將藥物分子偶聯(lián)到該試劑上，再通過生物素-親和素系統(tǒng)定向遞送至靶細胞。進入腫瘤細胞后，胞內(nèi)高濃度谷胱甘肽（GSH，2-10 mM）自動斷裂雙硫鍵，藥物在靶向位置選擇性釋放，提高治療選擇性并降低全身毒性。該策略可與納米載體、脂質(zhì)體、聚合物微球或水凝膠結(jié)合，開發(fā)智能控釋平臺。

六、細胞內(nèi)蛋白標記與追蹤

與Sulfo-NHS-SS-Biotin不同，Biotin-bisamido-SS-NHS Ester具有膜滲透性，可進入細胞標記胞內(nèi)蛋白。雙硫鍵在胞內(nèi)還原環(huán)境中可被谷胱甘肽切斷，實現(xiàn)生物素標簽的可控脫落，適合活細胞內(nèi)蛋白質(zhì)動態(tài)追蹤和功能研究。

七、生物傳感器與智能探針構(gòu)建

結(jié)合雙生物素的高親和力信號放大能力和雙硫鍵的可切割特性，構(gòu)建具有信號放大、可逆釋放和重復使用功能的生物傳感器。例如在分子診斷中，利用生物素-親和素體系實現(xiàn)高靈敏度檢測，同時利用二硫鍵實現(xiàn)可逆信號調(diào)節(jié)或檢測平臺的重復使用。

八、親和層析填料功能化

通過NHS酯與層析填料表面的伯氨基反應(yīng)，在填料表面構(gòu)建生物素-雙硫鍵修飾層，制備還原響應(yīng)型親和色譜填料。該填料可實現(xiàn)目標分子的特異性吸附與還原解吸，具備重復使用特性，有效降低實驗成本，且洗脫條件溫和，不破壞生物分子活性。

九、交聯(lián)研究

可用于蛋白質(zhì)與核酸、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的交聯(lián)研究，探究生物分子間的相互作用機制。交聯(lián)后通過還原劑可逆斷裂，便于后續(xù)分析。

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