MC (C5)-Val-Cit（N-馬來酰亞胺基己酰基-纈氨酸-瓜氨酸）

MC (C5)-Val-Cit 是一種經(jīng)典的可裂解ADC（抗體-藥物偶聯(lián)物）連接子。

CAS號：2504147-59-3 | 分子式：C??H??N?O? | 分子量：452.51

外觀為白色至淡黃色固體，純度≥95%。需在-20℃以下避光、干燥保存，避免反復(fù)凍融，保質(zhì)期約1年。溶于DMSO（≥37 mg/mL，50.15 mM）、乙醇（50 mg/mL，37.98 mM）、DMF、水等溶劑。預(yù)測密度1.38±0.1 g/cm3，pKa≈3.35。

結(jié)構(gòu)式：

基本組成

MC（C5）= N-Maleimidocaproyl（馬來酰亞胺基己酰基）。"C5"代表己酰基鏈中含有5個亞甲基碳原子（加上羰基碳共6碳）。馬來酰亞胺基團具有較高的硫醇反應(yīng)活性，能夠與抗體上還原態(tài)半胱氨酸殘基的巰基（-SH）在pH 6.5-7.5條件下發(fā)生邁克爾加成反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硫醚鍵（-S-），實現(xiàn)抗體與連接子的定點偶聯(lián)。

Val（纈氨酸） 是一個疏水性必需氨基酸，在二肽序列中提供結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，同時有助于增強連接子在血漿中的穩(wěn)定性，減少非特異性降解。

Cit（瓜氨酸） 是一種非必需氨基酸，其側(cè)鏈含有尿素基團，是組織蛋白酶B（Cathepsin B）的特異性識別位點。Cathepsin B在溶酶體中高表達，因此Val-Cit序列確保藥物僅在靶細胞被內(nèi)吞進入溶酶體后才被酶切釋放，極大降低了系統(tǒng)毒性。

核心功能

第一，巰基定點偶聯(lián)。 馬來酰亞胺端與抗體半胱氨酸的巰基高效反應(yīng)，偶聯(lián)位點明確、反應(yīng)專一，相比隨機賴氨酸偶聯(lián)，可獲得DAR值（藥物抗體比）更均一的ADC產(chǎn)品，藥代動力學(xué)更可控。

第二，組織蛋白酶B響應(yīng)性酶切。 Val-Cit二肽被溶酶體中的Cathepsin B特異性識別并切割，這是ADC在靶細胞內(nèi)釋放藥物的核心機制。在血液循環(huán)中，Val-Cit序列極其穩(wěn)定（半衰期長），不會發(fā)生提前釋放。

主要應(yīng)用

一是ADC藥物合成。 MC (C5)-Val-Cit是構(gòu)建ADC藥物的黃金標準連接子。具體流程：首先用TCEP或DTT將抗體的鏈間二硫鍵部分還原，暴露游離巰基；然后加入MC (C5)-Val-Cit（通常5-10倍摩爾過量），pH 7.0-7.5，室溫反應(yīng)1-2小時，完成連接子-抗體偶聯(lián)；最后通過PNP端或PAB端與含伯胺的細胞毒性藥物（如MMAE）反應(yīng)，完成ADC組裝。最終ADC在血液循環(huán)中穩(wěn)定，被靶細胞內(nèi)吞后在溶酶體中通過Cathepsin B切割釋放活性藥物。

二是ADC中間體與定制合成。 作為標準ADC連接子中間體，廣泛用于ADC藥物的研發(fā)和定制合成，支持DAR值優(yōu)化和藥代動力學(xué)研究。

三是可裂解生物偶聯(lián)。 利用馬來酰亞胺與巰基的專一性反應(yīng)，實現(xiàn)抗體的定點偶聯(lián)，再連接藥物、熒光探針、生物素等功能分子，構(gòu)建均一性高的偶聯(lián)產(chǎn)物。

四是藥物釋放機制研究。 利用Val-Cit的酶切特性，研究溶酶體內(nèi)藥物釋放動力學(xué)，優(yōu)化ADC的連接子設(shè)計。